影响母牛活体采卵效果的主要因素有哪些?
现在活体采卵(OPU)技术已经非常成熟了,通过活体采卵来获得大量遗传谱系明确的胚胎,可以很大程度的缩短世代间隔,加速遗传进展,在牛群改良上有很大的作用。但是影响活体采卵的成功率有许多因素:
不同采卵负压对 OPU 效果的影响:
采用不同采卵负压 ( 9333, 12998, 14665 和 17332Pa ) 对 4 头健康成年母牛进行 2 次 / 周连续 10 周 OPU , 表 1 显示, 采卵 负压的变化影响获卵数和回收率: 负压越低, 头均获卵数越少, 回收率也越低; 负压越高, 头均获卵数越高, 回收率也越高。但 采卵负压不可过高, 否则破坏卵丘细胞, 造成卵子质量下降。 本 实验中, 17332Pa 的负压已经对卵丘细胞造成损伤,使卵子质 量下降。
不同采卵间隔对 OPU 效果的影响:
选择 16 头健康成年母牛, 随机分成 3 组, 间隔 3 、 7 和 14 d 进行重复 OPU。结果见下表:
采卵方案 | OPU/头 | OPU/次 | 头均穿刺数/次 | 头均获卵/个 | 回收率/% |
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第一次 | 16 | 16 | 13.44 ± 1 | 6.88 ± 1.54 | 51.19 ± 5.44 |
间隔3天 | 6 | 24 | 7.71 ± 1.51 | 5.29 ± 1 | 68.61 ± 4.19 |
间隔7天 | 5 | 30 | 14.47 ± 1.46 | 7.17 ± 1.15 | 49.55 ± 4.04 |
间隔14天 | 5 | 25 | 15.16 ± 1.57 | 7.20 ± 1.24 | 47.49 ± 4.36 |
采卵前 FSH 处理对 OPU 效果的影响:
选择 13 头健康成年母牛, 间隔 7 d 连续进行 5 次 OPU 。 其中 9 头牛在采卵前 48 和 36 h 给供体牛分别注射 70 IU FSH (总剂量 140 IU ), 与对照组 ( 4 头 , 未处理) 比较。, FSH 组 A 、 B 级卵母细胞率、 卵裂率和桑囊 发育率差异均不显著,说明 FSH 处理可显著提高 OPU 卵子 数量, 但并不影响卵子质量和早期胚胎体外发育。
OPU 过程中真空泵压力和穿刺针的型号影响卵母细胞回 收率和质量 ( Manik , 2003 ); 合理的 OPU 时间间隔对于充 分提高优良母畜的利用率有重要意义。本研究表明, 使用 18G 采卵针在 14665 Pa 负压下卵子质量和回收率较高; 以 2 次 / 周 的时间间隔进行重复 OPU 是可行的,在同样的采卵时期内可获得较多的卵母细胞; OPU 前对供体用 FSH 处理可提高头均 获卵数, 但并不影响体外受精后的发育。 需要说明的是, 高频率 重复 OPU 对供体母牛繁殖机能会造成一定损伤,但是由于采卵设备不同、 技术熟练程度不同, 对损伤的程度以及损伤的恢 复情况的不一致也会影响采卵效果。